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Western blotting,一般使用二抗

2019-06-11 04:21
Western blotting,一般使用二抗 用WB染料标记的荧光抗体
Alexa的
是氟吗?
680是远红外荧光染料,其激发波长为702nm,发射波长为684nm。
Alexa的
是氟吗?
790是红外发光染料,其激发波长为803nm,发射波长为783nm(图1)。
由于低荧光猝灭,高消光系数和低背景荧光,抗体与远红外和红外发射染料的结合比可见光更敏感。
图1显示了第二种Alexa抗体。
是氟吗?
680(左)和AlexaFluor?
激发和发射光谱790(右)。
用于定量免疫印迹的高灵敏度免疫印迹,远红外和红外荧光染料
印迹),凝胶印迹(凝胶中的蛋白质印迹),微量分析(Micro Western)
阵列),In-Cell Western阵列,On-Cell Western阵列
需要微西方,组织切片图像,小动物和其他强光的整个动物图像的技术。
免疫沉淀后用于WB实验的二抗的选择
免疫沉淀后的西化
在转移研究中,Jackson提供了对轻链或Fc片段特异的抗体,并且可以分别检测分子量为50kDa或更高且25kDa或更高的抗原。
使用特异性标记重链和轻链的二抗时的Western免疫沉淀,如抗IgG(H + L)
通过印迹,重链和轻链的分子量分别为约50kDa和25。
kDa(图2A)。
使用特异性标记轻链的IgG轻链第二抗体(图2B),其仅结合第一抗体的轻链。
图2
HRP(H + L)标记的山羊抗小鼠IgG可以检测重链(50kDa)和轻链(25kDa)。使用特异性IgG作为轻链
即使在IgG过载的情况下,轻链二抗也不能检测到重链。
因此,检测约50kDa的蛋白质可用于避免重链和轻链特异性二抗干扰并使IP或CoβIP中的重链干扰最小化。可以使用对Fc片段特异的二抗来避免与轻链的干扰。


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